Trypanosoma cruzi XRNA granules colocalise with distinct mRNP granules at the nuclear periphery

BACKGROUND Eukaryotic ribonucleoprotein (RNP) granules are important for the regulation of RNA fate. RNP granules exist in trypanosomatids; however, their roles in controlling gene expression are still not understood. XRNA is a component of granules in Trypanosoma brucei but has not been investigated in Trypanosoma cruzi. OBJECTIVES This study aimed to investigate the TcXRNA dynamic assembly and its interaction with RNP components under conditions that affect the mRNA availability. METHODS We used in vitro metacyclogenesis of T. cruzi to observe changes in RNP granules during the differentiation process. TcXRNA expression was analysed by Western blot and immunofluorescence. Colocalisation assays were performed to investigate the interaction of TcXRNA with other RNP components. FINDINGS TcXRNA is constantly present during metacyclogenesis and is localised in cytoplasmic granules. TcXRNA does not colocalise with TcDHH1 and TcCAF1 granules in the cytoplasm. However, TcXRNA granules colocalise with mRNP granules at the nuclear periphery when mRNA processing is inhibited. MAIN CONCLUSIONS TcXRNA plays a role in mRNA metabolism as a component of mRNP granules whose assembly is dependent on mRNA availability. TcXRNA granules colocalise with distinct RNP granules at the nuclear periphery, suggesting that the perinuclear region is a regulatory compartment in T. cruzi mRNA metabolism.

Grânulos de processamento de mRNAs em Trypanosoma cruzi / Granules of processing of mRNAs in Trypanosoma cruzi

Em tripanossomatídeos a regulação da expressão gênica ocorre principalmente em nível pós-transcricional por mecanismos que envolvem mudanças na estabilidade e no acesso dos mRNAs aos polissomos. Estes mecanismos permitem uma rápida adaptação destes parasitas a diferentes condições as quais são expostos durante o ciclo de vida. Estudos recentes têm demonstrado que grânulos de mRNA, presentes em diversos eucariotos têm papel fundamental na regulação da expressão gênica em nível pós-transcricional. Estes grânulos são divididos em diferentes classes (entre elas os P-bodies e os grânulos de estresse), contém mRNPs não comprometidas com a tradução, compartilham algumas proteínas e podem utilizar mecanismos semelhantes para regular o metabolismo de mRNAs. Os P-bodies são sítios de estocagem e/ou degradação de mRNAs, enquanto os grânulos de estresse estão envolvidos na triagem e estocagem de diversos transcritos. Como existe evidência de que moléculas de mRNA podem ser mantidas estáveis e não associadas à polissomos em T. cruzi, nós conjecturamos a possibilidade de que estas estruturas estejam presentes e sejam funcionais neste parasita. Os genes que codificam alguns componentes de P-bodies estão presentes em T. cruzi e embora algumas proteínas que constituem o cerne destas estruturas pareçam estar ausentes neste parasita, a maioria das funções inerentes aos P-bodies estão representadas. Nós identificamos e clonamos a proteína TcDhh1, uma DEAD box RNA helicase altamente conservada entre os eucariotos e considerada marcadora de P-bodies em mamíferos e leveduras. Esta proteína é constitutivamente expressa durante todo o ciclo de vida do parasita, está presente em complexos independentes de polissomos e está localizada em foci citoplasmáticos que variam em número quando as células são submetidas a condições de estresse ou ao tratamento com as drogas cicloheximida e puromicina. Para determinar a composição destes grânulos, nós realizamos ensaios de...

Biological effects of extracts obtained from Stryphnodendron adstringens on Herpetomonas samuelpessoai

We report the effect of Stryphnodendron adstringens on the trypanosomatid Herpetomonas samuelpessoai. The parasites were grown at 28ºC in a chemically defined medium containing crude extract and fractions at concentrations from 100 to 5000 µg/ml obtained from S. adstringens. Concentrations of 500, 1000, 2500, and 5000 µg/ml both crude extract and semi-purified fraction progressively inhibited the protozoans' growth. At a concentration of 100 µg/ml, crude extract or a semi-purified (F3) fraction did not affect the growth of the protozoans. The F3-9 - F3-12 sub-fractions, at a concentration of 1000 µg/ml, also showed increased inhibitory activity on H. samuelpessoai. The IC50 of the crude extract and the F3 fraction were 538 and 634 µg/ml, respectively. Ultrastructural and enzymatic alterations in the trypanosomatids were also evaluated. H. samuelpessoai cultivated in the presence of IC50 crude extract showed considerable ultrastructural alterations, such as marked mitochondrial swelling with a large number of cristae and evident Golgi complex vesiculation, as observed by transmission electron microscopy. Cells exposed to 538 µg/ml of crude extract at 28ºC for 72 h, showed decreased activity of the enzyme succinate cytochrome c reductase, a typical mitochondrion marker, as compared to untreated cells.

Efeito de extratos de plantas medicinais no crescimento, diferenciação e ultraestrutura de Herpetomonas samuelpessoai / Extract effect of medicinal plants in the growth, differentiation and ultrastructure of Herpetomonas samuelpessoai

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos dos extratos brutos de quatorze plantas e do óleo essencial de acimum gratissimum, no crescimento e diferenciação celular de Herpetomonas samuelpessoai cultivada em meio quimicamente definido e meio complexo. Alterações ultraestruturais e enzimatica do tripanosomatídeo foram avaliadas utilizando extrato bruto e algumas frações de Striphnodendron adstringens e o óleo essencial. As plantas selecionadas através de informações etnobotânicas foram: Arctium lappa, Achillea millefolium, Erythrina speciosa, Eugenia uniflora, Lippia alba, Mikania glomerata, Piper regnellii, Plantago major, Psidium guajava, Punica granatum, Sambucus canadensis, Spilanthes acmella, Stryphnodendron adstringens, Tanacetum vulgare, e o óleo essencial de Acimum gratissimum. Um efeito antiprotozoário positivo foi encontrado nos extratos de L. alba, T. vulgare e P. regnellii, na concentração de 1.000 ug/mL, com 90,7 por cento, 97,4 por cento e 99,5 por cento de inibição de crescimento, respectivamente. Os extratos de A. millefolium, E. uniflora, M. glomerata, P. major, P. guajava, e P. granatum, mostraram fraca atividade inibitória. Por outro lado, A. lappa, E. speciosa, S. canadensis, e S. acmella demonstraram um estímulo no crescimento de H. samuelpessoai...

Screening of some plants used in the Brazilian folk medicine for the treatment of infectious diseases

Extracts of 13 Brazilian medicinal plants were screened for their antimicrobial activity against bacteria and yeasts. Of these, 10 plant extracts showed varied levels of antibacterial activity. Piper regnellii presented a good activity against Staphylococus aureus and Bacillus subtilis, a moderate activity on Pseudomonas aeruginosa, and a weak activity against Escherichia coli. Punica granatum showed good activity on S. aureus and was inactive against the other standard strains. Eugenia uniflora presented moderate activity on both S. aureus and E. coli. Psidium guajava,Tanacetum vulgare, Arctium lappa, Mikania glomerata, Sambucus canadensis, Plantago major and Erythrina speciosa presented some degree of antibacterial activity. Spilanthes acmella, Lippia alba, and Achillea millefolium were considered inactive. Five of the plant extracts presented compounds with Rf values similar to the antibacterial compounds visible on bioautogram. Of these, three plants belong to the Asteraceae family. This may mean that the same compounds are responsible for the antibacterial activity in these plants. Anticandidal activity was detected in nine plant extracts (P. guajava, E. uniflora, P. granatum, A. lappa, T. vulgare, M. glomerata, L. alba, P. regnellii, and P. major). The results might explain the ethnobotanical use of the studied species for the treatment of various infectious diseases

Effect of plant extracts used in folk medicine on cell growth and differentiation of Herpetomonas samuelpessoai (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) cultivated in defined medium

Neste trabalho, verificou-se o efeito de 15 plantas medicinais no crescimento e diferenciação celular de Herpetomonas samuelpessoai, um tripanosomatídeo não patogênico utilizado como modelo biológico, que apresenta antígenos semelhantes aos do Trypanosoma cruzi. Extratos brutos (1.000 mg/ml) ou óleo essencial (250 mg/ml) foram adicionados ao meio definido. O crescimento celular foi determinado pela contagem em câmara de Newbauer e a diferenciação celular examinada por microscopia ótica. Ocimum gratissimum, Lippia alba, Piper regnellii, Stryphnodendron adstringens, e Tanacetum vulgare mostraram atividade antiprotozoário, Psidium guajava e Punica granatum menor atividade e Achillea millefolium, Eugenia uniflora, Mikania glomerata, Plantago major, e Spilanthes acmella não apresentaram atividade. Por outro lado, Arctium lappa, Erythrina speciosa, e Sambucus canadensis estimularam o crescimento de H. samuelpessoai e L. alba e S. acmella a diferenciação celular deste flagelado. Estes resultados indicam que plantas medicinais possuem princípios ativos contra H. samuelpessoai, o qual parece ser útil como modelo para seleção de plantas que contém drogas tripanomicidas